News - Shifting-Nitroxide pour étudier l'hydrolyse enzymatique des acides gras par les lipases à l'aide de la résonance paramagnétique électronique dans les milieux troubles

Shifting-Nitroxide pour étudier l'hydrolyse enzymatique des acides gras par les lipases à l'aide de la résonance paramagnétique électronique dans les milieux troubles

L’équipe CRAB en collaboration avec l’équipe du Dr Mellet (CRSMB, Université de Bordeaux) ont mis au point une nouvelle technique d’étude in vitro de l’activité enzymatique des lipases par Résonance Paramagnétique Electronique. Cette approche basée sur le changement de constantes de couplage hyperfin de radicaux nitroxyles persistants en fonction de l’activité enzymatique permet de s’affranchir de tous les problèmes liés à l’utilisation des méthodes optiques.

Shifting-Nitroxides to Investigate Enzymatic Hydrolysis of Fatty Acids by Lipases Using Electron Paramagnetic Resonance in Turbid Media

Gerard Audran, Samuel Jacoutot, Natacha Jugniot, Sylvain R. A. Marque, Philippe Mellet,
Analytical Chemistry, 91 5504-5507 (2019)

While optical methods are not efficient enough for the easy, fast, and efficient detection of enzymatic activity in turbid media, the properties of the electron paramagnetic resonance (EPR) technique make it suitable for use in such media. Nitroxides which exhibit a change in their EPR hyperfine coupling constants upon enzymatic activity and are selective to lipases were developed under the name of shiftingnitroxides. Several fatty acids, exhibiting saturated and unsaturated chains of various lengths, were coupled with the shifting-nitroxide via an enol ester link and tested against several lipases. As the solubility of fatty acids is low in HEPES buffer, experiments were performed in turbid aqueous solution. Almost all labeled fatty acids were hydrolyzed by Candida rugosa lipase, and more selectivity is observed with Porcine Pancreas lipase type II. No activity was observed for lipase AK Amano 20, Candida antartica lipase B, and Mucor miehei lipase.